EVALUACIÓN DE LA POTENCIAL IRRITACIÓN DÉRMICA DEL POLEN DE ACACIA CAVEN (MOL.) MOLINA EN CONEJO. ESTUDIO HISTOLÓGICO

Cristina Barcia (1). María Eugenia Álvarez (1), Fabián Mohamed (2)y Alejandra María(1)

INTRODUCCIÓN

Acacia caven (Mol.) Mol., más conocida vulgarmente como "espinillo", "espino", "espino maulino", . churco", "quiringa", "caven", "aromo", "aromito", 1 churque", "tusca", es un árbol caducifolio, perteneciente a la familia Fabaceae presenta una copa amplia con estípulas espinosas, una corteza surcada de color castaño oscuro e inflorescencias axilares de pocos capítulos globosos, de color amarillo dorado, de 1 cm de diámetro¹.

Se asocia desde tiempos remotos con los usos populares de sus flores en perfumería y del tanino de sus frutos en la curtiembre de los cueros.

Es originaria de zonas áridas y semiáridas de América del Sur. Habita en forma natural en Bolivia, Chile, Argentina, Uruguay Brasil y Paraguay ².

Es una especie que se caracteriza por la gran facilidad para crecer y desarrollarse en ambientes diversos. Es muy resistente a la sequía, presenta gran capacidad de rebrote y niveles de 24% de proteína en las hojas verdes, por lo que constituye una excelente alternativa de alimentación para el ganado caprino. Además, mejora el nivel de fertilidad del suelo mediante la fijación de nitrógeno, a través de simbiontes presentes en sus raíces 3.

Muy recientemente, se han llevado a cabo estudios con enzimas proteolíticas del polen de diversas especies vegetales, puesto que éste después de la hidratación libera una variedad de enzimas que incluye a las proteasas 4, 1, 6 . Las proteasas de origen microbiano y vegetal continúan ocupando una posición expectante en los estudios fisiológicos, bioquímicos, biotecnológicos y farmacológicos que se llevan a cabo en centros de investigación de todo el mundo.

Según la bibliografía consultada, las proteasas del polen son importantes desde el punto de vista biológico, puesto que ellas son capaces de causar daños en las células epiteliales de las vías respiratorias, en cultivos in vitro ¹.

En este trabajo se abordó la investigación de la actividad irritante del polen de Acacia caven mediante la evaluación macroscópica (OECD)⁸ y la realización de un estudio histológico en piel de conejo.

MATERIALES Y MÉTODOS

Material vegetal

Las flores de Acacia caven (Mol.) Molina, se recolectaron en El Suyuque, San Luis, Argentina. Su clasificación fue realizada por el Ingeniero L. A. Del Vitto y col. de la Universidad Nacional de San Luis quedando registrada como Voucher N°462, 111, 1998. El polen obtenido, se mantuvo al abrigo de la luz, se secó a temperatura ambiente y se almacenó en desecador

Preparación de la muestra

Se preparación suspensiones de polen (I % y 2% p/v, en solución salina). Se agitaron cuidadosamente durante 24 h. a 4°C. Luego se ultracentrifugaron a 4°C durante 1 h a 34200 rpm. Los sobrenadantes obtenidos, muestras 1 y 2 respectivamente, fueron utilizados en los ensayos biológicos.

Determinación de la actividad irritante

Se definen a continuación los conceptos de irritación y corrosión dérmica.

Irritación dérmica: es la producción de un daño irreversible en el tejido epidérmico por la aplicación de la sustancia en estudio por, un lapso de 4 h.

Corrosión dérmica: es la destrucción completa del tejido epidérmico, también llamada necrosis visible a través de la epidermis y la dermis después de la exposición de 4 h.

Test inicial Según indica la Guía OECDI, se utilizó en una primera etapa un solo animal. Para evaluar si la sustancia en estudio causa corrosión, se utilizaron 3 parches aplicados en forma secuencial, los cuales fueron removidos a los 3 minutos, 1 hora y 4 horas. Los resultados de las observaciones evidenciaron ausencia de corrosión, prosiguiendo con el test confirmatorio.

Test confirmatorio

Se midió la irritación producida por las muestras 1 y 2 de polen de Acacia caven. Los animales utilizados fueron conejos albinos, adultos-jóvenes, de ambos sexos, de peso aproximado 2,5 a 3,5 kg. El día previo a la prueba, se delimitó el área (6 cm²) de trabajo a ambos lados del lomo y se rasuró el área dorsal del tronco del animal, evitando lesionar la piel. Las muestras fueron administradas mediante la aplicación de parches de gasa estéril de 2,5 x 2,5 cm aproximadamente, embebidos en 0.5 ml. Las dosis ensayadas fueron de 1 % y 2% (p/v).

Se realizó la evaluación de los resultados mediante la observación directa de aparición de eritema y/o edema, naturaleza de la irritación o corrosión y reversibilidad de todas las lesiones, utilizando como referencia la Tabla 1. Se efectuaron las lecturas de las características macroscópicas a las 4 y 24 h. Luego de la última observación se tomaron muestras de piel para la realización del estudio histológico. Se fUaron en líquido de Bouin y se procesaron por la técnica histológica de rutina para microscopía óptica. Se obtuvieron cortes de 5 mm de espesory se colorearon con Hematoxilina-Eosina.

 

RESULTADOS

Las observaciones realizadas en el test inicial, evidenciaron ausencia de corrosión.

Los resultados del examen macroscópico en el test confirmatorio, se evaluaron mediante lecturas de las reacciones cutáneas (eritema, formación de escara y edemas), según la escala propuesta por el método (ver Tabla l). Los ensayos realizados en piel de conejo evidenciaron ausencia de edema en todos los casos. El eritema ligeramente perceptible se consideró de grado 1 a las 4 h. Se observó la reversibilidad del eritema, luego de la última lectura. Estos resultados indican que las muestras 1 y 2 carecen de propiedades irritantes.

El estudio histológico del grupo administrado con la dosis 1 % evidencia un aspecto normal de la piel con muy pocas lesiones escamosas caracterizadas por la presencia de pérdida de continuidad del epitelio e invasión leucocitaria. En el grupo tratado con la muestra 2 (2%) estas lesiones se ven acentuadas.

En las Figura 1 (Ay B) se puede observar la epidermis, con epitelio estratificado, y el tejido conectivo subyacente, la dermis, con abundantes folículos pilosos. En lafigura 2 ( A y B) se observan escasas lesiones epiteliales de tipo escamoso, con pérdida de la continuidad del epitelio. Existe una clara invasión leucocitaria en el tejido conectivo subyacente. La dermis no presenta modificaciones histológicas constitutivas. En las figuras 3 (Ay B) se observan las lesiones más acentuadas, con una mayor invasión linfocitaria principalmente. No se observan alteraciones histoarquitecturales en el tejido conectivo subyacente.

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES

Redescubierto a mediados de este siglo, el polen de las flores formado por más de 100 elementos conocidos y por muchos otros que todavía se desconocen, posee un radio de acción muy complejo.

Muy recientemente, se han llevado a cabo estudios preliminares de caracterización de enzimas proteolíticas de¡ polen de diversas especies vegetales para establecer su influencia en el asma, rinitis y procesos estacionales.

Las flores de Acacia caven, dispuestas en inflorescencias globosas densas, son útiles para la fabricación de productos aromáticos, perfumes y aceites esencialesio.

Los resultados de¡ examen macroscópico indicaron que el polen de Acacia caven carece de propiedades irritantes. Sin embargo el estudio histológico reveló ¡a presencia de alteraciones en el epitelio, y estudios posteriores serán necesarios para determinar la reversibilidad de las mismas.

Este estudio experimental válida científicamente los usos populares de¡ polen de Acacia caven (Mol.) Mol. en perfumería y potencia su uso como complemento alimentarlo, reconstituyente y fármaco, en particular en tratamientos de belleza, donde ya se demostraron sus propiedades suavizantes y descongestivas de la piel.

AGRADECIMIENTOS

Al Ingeniero Luis Del Vitto del Herbario de la Universidad Nacional de San Luis, por la clasificación del material vegetal y el asesoramiento botánico. A la Técnica Angelina Bernardi por la asistencia en e¡ estudio histológico. Este trabajo fue financiado con subsidio de la Secretaría de Estado de Ciencia y Tecnología a través de los Proyectos 9800 y 8504, Universidad Nacional de San Luis, dirigidos por la Dra. Sonia E. Barberis y la Dra. Lilian Peizer, respectivamente