EFECTOS DEL BROMURO BENZALCONIO SOBRE EL SISTEMA
INMUNE Y SU RELEVANCIA A LA INHIBICIÓN DEL VIRUS DEL SIDA

Patarca, Roberto.*; Fletcher, Mary Ann*

RESUMEN

El bromuro de laurildimetilbenzilamonio es una sal de benzalconio o alquilamina biocida que interfiere con la transducción de señales en una variedad de tipos y procesos celulares a través de su actividad sobre membranas biológicas y su acción sobre proteínas que interactúan con el nucleótido de guanina trifosfato (proteínas G). En el presente trabajo se exploraron los efectos del bromuro de laurildimetilbenzilamonio sobre el sistema inmune y su relevancia al ciclo de vida del virus de inmunodeficiencia adquirida. Se encontró que este biocida inhibe de manera dosis-dependiente;dependiente la actividad proliferativa estimulada por mitógenos de linfocitos T y B. A pesar de que no afecta la expresión de marcadores de superficie en, células inmunes en reposo o en proliferación, el bromuro de laurildimetilbenzilamonio afecta diferencialmente la expresión de genes de citoquinas, probablemente como reflejo de una dependencia variable de la expresión de estas últimas sobre procesos mediados por proteínas G. Además, el bromuro de laurildimetilbenzilamonio no afecta la actividad citotóxica de células asesinas naturales - dependiente;intactas contra células K562, una actividad que ha sido reportada como insensible a anticuerpos anti-dependiente;GS' Las observaciones presentadas en este trabajo junto con reportes previos de actividad viricida y espermicida directa, favorecen el uso de las sales benzalconio en preparaciones de uso tópico para la prevención de infecciones venéreas virales como, por ejemplo, aquellas usadas en condones.

Palabras clave: virus de inmunodeficiencia humana. Biocida. Proteínas G. Citoquinas, células NK.

SUMMARY

Lauryldimethylbenzylammonium bromide is a benzalkonium salt or alkylamine biocide that affects signal transduction in a variety of cell types and processes through its cell-dependiente;surface membrane activity and its interaction with guanine nucleotide triphosphate-binding proteins (G proteins). The present report explores the effects of lauryldimethylbenzylammonium bromide on the immune system and their relevance to the life cycle of the human immunodeficiency virus. The latter biocide was found to downregulate in a dose-dependent;dependent manner mitogen-dependent;stimulated T-dependiente; and B-dependiente;lymphocyte proliferative activity. Although it does not affect unstimulated or stimulated immune cellsurface marker expression, lauryldimethylbenzylammonium bromide differentially affects cytokine gene expression, probably as a reflection of variable cytokine gene expression dependence on G-dependiente;protein-dependiente;mediated pathways. Moreover, lauryidimethylbenzyiammonium bromide does not affect cytotoxic activity of intact natural killer celis against K562 cell targets, an activity that has been reported to be insensitive to anti-dependiente;Gs antibodies. The observations presented herein along with previous reports of direct viricidal and spermicidal activities favor the use of benzalkoníum salts in topical clínical preparations for the prevention of viral venereal infections as, for instance, those used in condoms.

Key words: human immunodeficiency virus, biocide, G-dependiente;proteins, cytokínes, NK cells.(Dermatol.peru. 1998; 8(1) :

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INTRODUCCIÓN

Las sales de benzalconio son amonios cuaternarios usados comúnmente como desinfectantes en soluciones de uso clínico o comercial y, en concentraciones de 0.05% y superiores, ejercen un efecto inhibitorio directo sobre la actividad de la transcriptasa inversa del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) e inactivan a este virus en secreciones seminales y genitales (1). La exposición de VIH al cloruro de benzalconio en concentraciones superiores al 0.05% destruye la infectividad viral de células blanco susceptibles (1).

Además de los efectos viricidas directos mencionados, las sales de benzalconio pueden afectar el ciclo de vida de VIH en otros puntos, ya que afectan la función de proteínas heterotriméricas regulatorias que interactúan con el nucleótido guanina (proteínas G). En tal sentido, una molécula de superficie acoplada a proteína G denominada "fusina", la cual comparte 37% de identidad al nivel de aminoácido con el receptor de interleucina 8, ha sido identificada como cofactor para la entrada a la célula de cepas linfotrópicas de VIH (2), y un receptor de quimoquina funciona como el cofactor de entrada a los macrófagos de cepas monotrópicas primarias de VIH (3.4) . Estas observaciones abren la posibilidad de que sustancias como las sales de benzalconio que interactúan con proteínas G inhiban la entrada del VIH a las células.

El requerimiento del VIH de la activación o proliferación de la célula huésped para su replicación provee otro posible punto de inhibición de las sales de benzalconio en el ciclo de vida de este virus. En tal sentido, existe amplia evidencia sobre la participación de las proteínas G en el crecimiento y diferenciación de varios tipos celulares (5-7), y las sales de benzalconio tienen un efecto antiproliferativo sobre células de linfoma múrido (8), fibroblastos humanos (9), fibroblastos de cápsula de Tenon humanos (10,11), células V79 (12), células de red trabecular humana (13), y queratinocitos humanos y de rata (9, 14-16).

En el presente trabajo demostramos que el bromuro de benzalconio inhibe la proliferación de linfocitos humanos y afecta diferencialmente la expresión de citoquinas, tales como el factor de necrosis tumoral por células inmunes, sin afectar la expresión de marcadores de superficie en dichas células o la actividad citotóxica de células asesinas naturales.

MATERIALES Y MÉTODOS

La actividad proliferativa de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) en respuesta a la fitohemaglutinina, un mitógeno dependiente de célula T, y al mitógeno de fitolaca, el cual es dependiente de célula B, fue medida en ensayos de sangre completa a través de la incorporación de timidina tritiada tal como se ha descrito anteriormente (17) . Brevemente, se disolvió, en proporción de 1:5, sangre heparinizada en medio RPMI 1640 conteniendo suero de becerro fetal al 10% e inactivado con calor, HEPES, L-glutamina (1 mM), 100 unidades de pencicilina y 50 mg de estreptomicina. Esta mezcla fue dispensada por triplicado en platos de microdilución (Costar, Cambridge, MA) y se añadieron el mitógeno y la sal de bromuro de benzalconio para un volumen final de 200 ml/pozo. Los platos fueron incubados por 3 días (o por dos días para los replicados usados en las determinaciones de niveles de citoquinas) a 37 grados Celsius en una atmósfera humidificada de 5% de CO2. Seis horas antes de completar el periodo de incubación, los cultivos fueron pulsados con 25 mil de timidina tritiada (1 mCi/pozo; Dupont, NEN Research Products, Boston, MA). Al final del periodo de incubación, los cultivos fueron colectados en discos de papel de filtro de vidrio y contados en un contador de centelleo beta (LKB Instruments, Inc., Rockville, MD).

Las células de los experimentos de proliferación descritos anteriormente fueron incubadas con anticuerpos monoclonales específicos para distintos marcadores de superficie celular y analizadas por citometría de flujo basada en anticuerpos fluorescentes de dos colores usando el instrumento Coulter Elite tal como se ha descrito anteriormente (18).

Las concentraciones, de citoquinas en los fluidos sobrenadantes de los cultivos de PBMC descritos anteriormente fueron determinadas usando inmunoensayos de fase sólida comerciales (R&D Systems, Minneapolis, MN) tal como se ha descrito en detalle anteriormente(19).

La actividad citotóxica de células asesinas naturales fue determinada usando el ensayo de liberación de Cr51 tal como se ha descrito anteriormente(20). La línea celular K562, una línea eritroleucémica sensible a actividad NK, fue usada como blanco. Los ensayos fueron realizados en triplicado usando cuatro proporciones de células blanco a efector con una incubación de cuatro horas. La liberación total fue determinada a través de la lisis de las células con Tritón X y los resultados fueron expresados en la gráfica como proporciones de liberación experimental en relación a liberación total después de la sustracción de liberación espontánea.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los experimentos resumidos en la Figura 1 muestran que el bromuro de benzalconio inhibe de manera dosis-dependiente la proliferación en ensayos de sangre completa de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) en respuesta a la fitohemaglutinina (PHA), un mitógeno dependiente de células T, y al mitógeno de la fítolaca (PWM) el cual es dependiente de células B. Las concentraciones de inhibición media (IC50) de la sal fueron de 0.025% en los ensayos de proliferación con PHA y con PWM. A pesar del efecto antiproliferativo del bromuro de benzalconio, no se observaron cambios en las proporciones de células sin estimular o estimuladas con mitógeno expresando distintos marcadores de superficie celular (CD2, CD3, CD4, CD5, CD8, CD11 la, CD19, CD20, CD29, CD45RA), incluyendo marcadores de activación (CD26, HLA-DR) (Figura 2).

La falta de efecto del bromuro de benzalconio sobre las proporciones de células linfoides fue confirmada a través de la incubación de sangre periférica por 4 horas con diferentes concentraciones de la sal (Figura 3). En tal sentido, las proporciones de células T expresando el complejo asociado a receptor de célula T: CD3; CD2; el pan-marcador de célula T, CD5; el marcador de activación CD26 (CD3+CD26+; CD2+CD26+); los subconjuntos de células T CD4+ (CD4+CD45RA+ y CD4+CD29+); los subconjuntos de células T CD8+ (CD8+CDlla+ y CD8+HLADR+) y de células B (CD19+ y CD20+) permanecieron inalteradas aún a concentraciones de bromuro de benzalconio que causan inhibición total de la actividad antiproliferativa. Estas observaciones sugieren que el bromuro de benzalconio no actúa en detrimento de la viabilidad de subpoblaciones particulares de células linfoides y que las proporciones relativas de estas células se mantienen a pesar de la inhibición de la actividad proliferativa. Sin embargo, es posible que la expresión de marcadores de activación estudiados es proximal al estadio del ciclo celular afectado por el bromuro de benzalconio, y que la proporción de otros marcadores de activación sea afectada.

La inhibición de la actividad linfoproliferativa por parte del bromuro de benzalconio, posiblemente a través de procesos mediados por proteínas G, puesta en evidencia en este estudio es concordante con la observación previa de que una proteína G sensible a la toxina del cólera regula la proliferación de células T (21). Además, un mecanismo mediado por un receptor acoplado a una proteína G sensible a la toxina de la tos ferina, es responsable de la inhibición por parte de compuestos canabinoides (mariguana y delta9-tetrahidrocanabinol) de las respuestas de proliferación linfocitaria a PMA más ionomicina y de las respuestas celulares de formación de anticuerpos IgM dirigidas contra eritrocitos de oveja(22,23). 

La hiporeactividad a largo plazo de células T después de estimulación a través del receptor de antígeno puede también ser consecuencia de la transducción de señales acoplada a proteína G(24).
En tal respecto, la perturbación del complejo de receptor de antígeno de linfocito T/CD3 ó la estimulación por forbol éster de células T Jurkat conlleva a la activación de fosfolipasa D, probablemente secundaria a la activación de proteína quinasa C(25) ó a un mecanismo mediado por proteína G. En apoyo a esta última propuesta, cabe resaltar que una proteína G de 68-kDa, la cual es insensible a las toxinas del cólera o de la tos ferina, ha sido asociada específicamente con el complejo receptor de célula T/CD3(26). Otra evidencia de la participación de la señalización por proteína G en la activación de célula T viene de estudios del H12.3, un gen que pertenece a la familia de subunidades b de proteínas G, la expresión del cual es inducida en la fase tardía de estimulación mitogénica de células T y B(27).

En cuanto a la expresión de genes de citoquina, el bromuro de benzalconio inhibe la liberación de factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) por parte de células mononucleares de sangre periférica estimuladas con mitógeno (Figura 4). Esta última observación es consistente con el hecho de que una proteína G sensible a la toxina del cólera, junto con una proteínquinasa dependiente de calmodulina y una proteíntirosinquinasa, está involucrada en la liberación de TNF-a por parte de monocitos humanos tras inducción por peptidoglicano y por lipopolísacárido de Staphylococcus epidermidis (28). También se ha demostrado que la liberación de TNF-a es inhibida por la pentoxifilina [Trental; 3,7-dimethyl-1-(5-oxohexy1) xantina], la cloroquina, y el antioxidante apocinina(28). Debido a que la unión del VIH-1 al receptor CD4 induce la expresión, por parte de PBMCs, de TNF, el cual, a su vez, potencia la replicación viral (29 ' 30) , estimula la actividad linfoproliferativa de células T(31), y disminuye la eficacia terapéutica de la zidovudina (azidotimidina, AZT), la inhibición de la liberación de TNF por parte de las sales de benzalconio puede
contribuir a la inhibición de tanto la linfoproliferación como de la replicación del VIH. En tal sentido, se ha demostrado que la pentoxifilina inhibe la liberación de TNF tiene actividad contra la replicación del VIH, y es beneficiosa en pacientes con cáncer (18,32). 

En contraste con su efecto potencial sobre la expresión de TNF-a, el bromuro de benzalconio induce la producción de interleucina-1b en PBMC estimulados con PHA pero no afecta la producción de IL-1b por PBMC en respuesta a PWM (Figura 4). En tal sentido, cabe resaltar que se ha demostrado que el cloruro de benzalconio induce la producción intracelular en queratinocitos humanos de IL-la sin liberación concomitante al medio de cultivo(33). A pesar de que las proteínas G también están involucradas en la transducción de señales asociadas a IL-1, dicha señalización puede incluir mecanismos distintos a los receptores acoplados a proteína G convencionales(34).

La migración de leucocitos neutrófilos a focos inflamatorios es importante para la eliminación de microorganismos. La respuesta quimiotáctica inicial es mediada por quimioatrayentes clásicos como el formil-Met-LeuFen o quimoquinas como IL-8 y RANTES las cuales se unen a receptores con siete porciones transmembrana y acoplados a proteína G (35-43). IL-8 es producida en respuesta a estímulos inflamatorios tales como lipopolisacárido, IL-1 y TNF(40,44). Consistente con su efecto inhibitorio sobre la expresión de TNF-a en PBMC estimulados con mitógeno y del efecto estimulatorio sobre la expresión de IL-1, la presencia del bromuro de benzalconio durante la estimulación mitogénica de PBMCs tiene un efecto ligeramente inhibitorio sobre la producción de IL-8 (Figura 4) lo cual podría afectar consecuentemente la quimiotaxis de leucocitos. En tal sentido, se ha demostrado que el cloruro de benzalconio, en concentraciones de 0.8 mg/l, es perjudicial a la quimiotaxis de granulocitos humanos (45) y que, dependiendo de la concentración y el tiempo de incubación, tiene un efecto perjudicial sobre la polimerización de actina, la fagocitosis y los procesos oxidativos en neutráfilos humanos (46). La inhibición de la función granulocítica no es absoluta ya que, en otro estudio, el cloruro de benzalconio (0.1% peso/volumen) causó un incremento de cinco veces en la actividad de elastasa en leucocitos humanos expuestos a sustratos de 4-nitroanilida(47), y estudios en células de red trabecular bovina mostraron poco cambio en la organización de la vimentina y actina y en la condensación de fibras citoesqueléticas después de incubación con cloruro de benzalconio (48).

Debido a que TNF-a e IL-8 tienen actividad angiogénica(44, 49-51), la inhibición potencial de su producción mediada por las sales de benzalconio puede ser relevante a la prevención y/o tratamiento de procesos angiogénicos asociados a microbios, tales como el sarcoma de Kaposi, la bartonelosis o verruga peruana, y la angiomatosis bacilar (52-61).

Las sales de benzalconio pueden afectar varias rutas relacionadas a la angiogénesis porque TNF-a induce la expresión de c-ets 1(62) y B61 (63) en células endoteliales al igual que la liberación de mediadores secundarios, tales como las prostaglandinas(49) y el factor de activador de plaquetas (1-0-alkyl-2-acetil-sn-glicero-3-fosfocolina)(64,65). En tal sentido, se cree que c-ets 1 regula la transcripción de genes que codifican proteasas degradadoras de matriz necesarias para angiogénesis(62) , y B61 es un producto de gen de célula endotelial el cual es angiogénico y también puede funcionar como quimotaxina de célula endotelial a través de su interacción con la tirosinquinasa del receptor Eck de célula endotelial.

El factor angiogénico y quimiotáctico IL-8 y las citoquinas IL-6, IL-3, y TNF-b también modulan, a través de la interacción con proteínas G, la formación de leucotrienos inducida por formil-Met-Leu-Fen en neutrófilos(66) . Por tanto, el efecto inhibitorio del bromuro de benzalconio sobre la producción estimulada por PWM de IL-6 y de la producción estimulada por PHA de IL-3 por parte de PBMCs (Figura 4) puede también afectar la función neutrofílica. Además, IL-3 estimula la supervivencia y proliferación de líneas celulares precursoras multipotenciales indirectamente a través de proteína(s) G sensible a la toxina de la tos ferina(67), y los mastocitos que son dependientes de IL-3 portan una proteína G sensible a la toxina de la tos ferina acoplada al receptor de prostaglandina(68).

En relación con la expresión de citoquinas asociada a células T, el bromuro de benzalconio no altera la expresión de IL-4 o de HLA-DR por PBMC activados por PHA ó PWM. Esta última observación es consistente con la observación de que IL-4 aparentemente induce la expresión de HLA-DR en monocitos normales humanos o en células blanco de leucemia M2 también a través de una ruta de señalización mediada por proteína G(69) la cual podría ser sensible a las sales de benzalconio. El bromuro de benzalconio también inhibe la producción de IL-2 e IL-5 por PBMC activados por PHA. La inhibición por el bromuro de benzalconio de la producción de IL-5 también es relevante a las respuestas inflamatorias locales pues IL-5 induce la diferenciación y proliferación de eosinófilos en médula ósea, activa eosinófilos y prolonga su supervivencia ín vitro(70-77), y estimula la producción de quimioatrayentes de linfocitos por parte de eosinófilos humanos(78).

Las proteínas que interactúan con GTP juegan un papel importante en el control de la exocitosis. Por ejemplo, clones de linfocitos T citotóxicos CD8+ permeabilizados con la toxina A de Staphylococcus aureus pueden ser estimulados a liberar los contenidos de sus gránulos por exocitosis en respuesta al 5'-(gamma-tio)trifosfato (GTP gamma S)(79). El uso de varios inhibidores que actúan en las fases tempranas de la activación de células T ha revelado que la proteína G que afecta a la exocitosis está localizada distalmente en la cascada de eventos que desencadena la activación de células T(79). Por ejemplo, el inhibidor de proteína quinasa C estaurosporina, y los inmunosupresores ciclosporina A y FK-506, y el inhibidor de tirosina quinasas genisteína, todos inhiben la liberación de esterasa activada en células intactas por anticuerpos anti-receptor de célula T, pero no la liberación inducida por GTP gamma S en células permeabilizadas. La ciclosporina A, FK-506, y genisteína también bloquean la exocitosis inducida en células intactas por una combinación de forbol éster y ionóforo de calcio A23187. Además, la citocalasina B, un inhibidor de la polimerización de actina, inhibe la exocitosis en células intactas pero aumenta la exocitosis en células permeabilizadas.

Las células asesinas naturales (células NK) son una subpoblación de linfocitos que mata a células infectadas por virus y células tumorales sin sensibilización previa(20) . La participación de una proteína G en la exocitosis granular en células NK es también demostrada a través de la permeabilización de dichas células e incubación con GTP gamma S e IL-2 ó IL-12 (80). En tal sentido, la introducción de anticuerpos anti-proteína G dentro de células NK activadas por IL-2 y permeabilizadas con estreptolisina 0 (células IANK) inhibe el asesinato celular de células blanco RAJI NK-resistentes/IANK-sensibles pero no de células blanco K562 NK-sensibles . Las células K562 y RAJI inducen la liberación de a0, ai, as o aq.11 de membranas de células IANK, lo cual sugiere que los receptores potenciales que reconocen las células blanco K562 ó RAJI están acoplados a G0 en células IANK, pero sólo aquéllos que reconocen a las células RAJI están acoplados con Gs(81). Tal como lo ilustra la Figura 6, en concentraciones de hasta 0.025%, el bromuro de benzalconio no afecta la actividad citotóxica de células NK intactas sobre células blanco K562, lo cual sugiere que la proteína G0 que puede estar acoplada al receptor K562 es insensible al bromuro de benzalconio. Habría que determinar si las proteínas G, acopladas a los receptores de RAJI son sensibles a las sales de benzalconio.

Ver figura 5

También de relevancia a la actividad anti-VIH es la demostración de que el cloruro de benzalconio induce un estado de activación metabólica en una alta proporción de células de Langerhans epidérmicas CD1+(82) en el contexto de aposición significativa de linfocito/célula de Langerhans. En este sentido es diferente a otros irritantes como el sulfato de laurilo sódico, el ditranol, el ácido nonanoico, el aceite de crotón, y el propilénglicol. La activación de células CD1+ inducida por sales de benzalconio es relevante a la inmunidad micobacteriana porque las células CD4-CD8- con un receptor de célula T a/b y específicas para CD1 (una familia de glicoproteínas asociadas a la b2-microglobulina, no polimórficas, no codificada por MHC) reconocen antígenos no peptídicos bacterianos tales como el ácido micólico (una familia de ácidos grasos de cadena larga ), lipoarabinomanam (LAM), y TUBag4 (un compuesto que contiene timidina trifosforilada en 5')(83-86). Además, se ha demostrado que las células T a/b CD4-CD8- expresan niveles altos de Eta-1/ osteopontina, una citoquina asociada con resistencia natural a Rickettsia tsutsugamushi, flavivirus, y posiblemente Bartonella bacilliformis(53. 87-91). Queda por determinar si las sales de benzalconio pueden estimular las células CDl+ y la producción de Eta-1/osteopontina.

En cuanto a la utilidad práctica de estudios de sales de benzalconio sobre el sistema inmune y el ciclo de vida del VIH, se ha demostrado que el cloruro de benzalconio y el nonoxydol-9 son espermicidas benignos (no inducen cambios citológicos en el epitelio cérvico-vaginal) y eficientes cuando se usan correctamente durante el acto sexual Estos surfactantes tienen una mayor actividad espermicida (concentraciones de 0.025% inhiben totalmente la movilidad espermática después de 30 segundos de exposición) que el docusato de sodio y el antiséptico clorhexidina(97,98). Como detergente catiónico o sapónico y surfactante de la serie amonial, el cloruro de benzalconio rompe la membrana espermática (99). Además, el gel F-5 (que contiene ácido cólico, cloruro de benzalconio, y nonoxydol 9) en la esponja contraceptiva “Protectaid” ejerce una actividad inhibitoria dosis-dependiente sobre la transcriptasa inversa asociada con VIH-1 en un sistema acelular, y sobre el potencial de VIH-1 de infestar eficientemente linfocitos humanos (100) .

Los estudios conducidos en Italia desde 1983 hasta 1986 (95) en España(96) y en Francia(93) mostraron que el cloruro de benzalconio en una esponja, supositorio, o tampón (cilindros de polivinil suave) es un contraceptivo que es también útil en la prevención de enfermedades transmitidas sexualmente. Un estudio en Alemania, conducido entre marzo de 1986 y Diciembre de 1987, fue inconcluso porque la liberación del espermicida de la esponja no era confiable(99). Una ventaja del cloruro de benzalconio sobre el nonoxydol-9, consiste en la falta de absorción del primero a través de la pared vaginal, tal como se ha demostrado en pruebas en mujeres y ratas(97). En tal sentido, cabe resaltar que la dosis a la cual el cloruro de benzalconio puede ser embriocida y fetocida en la rata es aproximadamente 143 veces superior a la recomendada para controlar la concepción en mujeres (101,102).

En resumen, hemos demostrado en este reporte varias posibles actividades inhibitorias de las sales de benzalconio sobre VIH: [1] Las sales de benzalconio inhiben la proliferación de células T la cual es requerida para la replicación de VIH en tales células, [2] VIH usa receptores acoplados a proteínas G como cofactores de entrada a las células T CD4+ y a los monocitos, y las sales de benzalconio interactúan con proteínas G; [3] el bromuro de benzalconio inhibe la producción de TNF-a, una citoquina que estimula la actividad linfoproliferativa de célula T y la replicación de VIH. Estas últimas observaciones junto con aquellas mencionadas en la Introducción y en la Discusión (resumidas en la Figura 6 como segmentos del ciclo de vida de VIH potencialmente sensibles a las sales de benzalconio), junto con la actividad espermicida de las sales de benzalconio, favorecen su uso en las concentraciones adecuadas como contra-ceptivos y como armas contra agentes tales como VIH, papilomavirus y herpesvirus, los cuales están involucrados en enfermedades transmitidas sexualmente. Estudios futuros sobre las aplicaciones terapéuticas de las sales de benzalconio requerirán de determinaciones de sus propiedades de absorción, farmacoquinética, y farmacodinámica en sistemas corporales.

Agradecimientos: los autores agradecen a los laboratorios K-Ller, Caracas, Venezuela y a su presidente el Sr. Antonio Casia, por haber proporcionado el bromuro de laurildimetil benzilamonio.

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ADJUNTOS

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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*Departarnentos de Medicina, y Microbiología e Inmunología; Escuela de Medicina de la Universidad de Miami, Laboratorio E.M.
  Papper de Inniunología Clínica, P.C. Box 016960 (R42), Miami, FL 33101, E. U.A.